原理

もっとも古典的な比色定量法である。

アミノ酸が3つ以上繋がったトリペプチド以上のオリゴペプチド・タンパク質を、アルカリ条件下でCu2+を反応させると、Cu+となってペプチド結合を赤紫色の複合体を形成する。ペプチド結合の数が多くなると強く呈色する。この現象を利用して、540 nmにおける吸光度を測定し、検量線を用いて定量する。錯形成がビウレット―銅錯体と類似しているため、この反応名が付けられている。

Lowry法やBCA法はこれを改良したものに相当する。

長所

• タンパク質組成の違いによる影響を受けにくい
• 操作が簡便
• 界面活性剤・脂質の影響を受けにくい

短所

• 測定範囲は1-10 mg/mL、感度は低い
• 高濃度のTrisやアンモニウムイオンによって発色が影響される

プロトコル

Biuret試薬の調製法

CuSO₄･5H₂O（3 g）、酒石酸ナトリウムカリウム（12 g）、MQ水（500 mL）を混ぜて攪拌しながら、10% NaOH（600 mL)、ヨウ化カリウム (4 g)を加え、MQ水で2 Lにメスアップする。調製した試薬は室温で数ヶ月保存可能。

プロトコル

1. タンパク質溶液サンプル（100 μL）にBiuret試薬を1mL加えてボルテックス攪拌する。
2. 室温で20-30分以上静置する
3. 540 nmの吸光度を測定する
4. BSAを標準試料として希釈系列と検量線を作成し、それをもとに濃度を定量する。

関連動画

参考文献

1. ”総タンパク質の定量法”　鈴木祥夫、ぶんせき 2018, 1, 2. [PDF]
2. “[6] Quantification of protein” Stoscheck, C. M. Met. Enzymol. 1990, 182, 50. doi:10.1016/0076-6879(90)82008-P
3. “A New Colorimetric Assay of Tabletop Sweeteners Using a Modified Biuret Reagent” Fenk, C. J.; Kaufman, N.; Gerbig, D. G. Jr. J. Chem. Educ. 2007, 84, 1676. doi:10.1021/ed084p1676

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外部リンク

• ”総”タンパク質定量法の種類をまとめてみた（Thermo Fisher）
• タンパク質を定量したい（同仁化学、PDF）
• 分光光度計を利用したタンパク質の定量（Cytiva）
• タンパク質の定量法（生命医学をハックする）
• タンパク質の定量
• ビウレット反応 – Wikipedia
• Biuret test – Wikipedia