原理

ローリー法（Lowry Method）はBiuret法をさらに発展させた比色法であり、タンパク質濃度定量に用いられる。

アルカリ性条件でCu²⁺をタンパク質に加えることで還元体のCu⁺が生成するが、これがFolin-Ciocalteu試薬中のタリンモリブデン酸-タングステン錯体を還元し、青く発色する。これを770 nmの吸光度を測定することによって定量する。

長所

• 測定範囲は0.2-2 mg/mL、Biuret法より改善している
• 操作が簡便

短所

• 反応に時間がかかる。
• 界面活性剤、キレート剤、チオール還元剤などで妨害をうける

プロトコル

Lowry試薬の調製法

A液
Na₂CO₃（20 g）、NaOH（4 g）をMQ水に溶解し全量1 Lとする。室温～冷蔵下にで、数ヶ月保存可能

B液
Cu₂SO₄-5H₂O（1 g）、酒石酸ナトリウムカリウム（2 g）をMQ水に溶解し、全量200 mLとする。室温～冷蔵下にで、数ヶ月保存可能

Folin-Ciocalteu フェノール試薬

市販品を購入。

プロトコル

1. 50容量のA液と、1容量のB液を混合する（用時調製）
2. サンプル（100 μL）に対し、1.の混合液を1mL加え、ボルテックス攪拌する
3. 30℃で10分静置する
4. Folin試薬を100μL加え、ボルテックス攪拌する
5. 30℃で30分静置する
6. 770 nmの吸光度を測定する。
7. BSAを標準試料として希釈系列と検量線を作成し、それをもとに濃度を定量する。

関連動画

参考文献

1. ”総タンパク質の定量法”　鈴木祥夫、ぶんせき 2018, 1, 2. [PDF]
2. “[6] Quantification of protein” Stoscheck, C. M. Met. Enzymol. 1990, 182, 50. doi:10.1016/0076-6879(90)82008-P
3. “Protein Measurement with the Folin Phenol Reagent” Lowry, O. H.; Rosebrough, N. J.; Farr, A. l.; Randall, R. J.  J. Biol. Chem. 1951, 193, 265-275. doi:10.1016/S0021-9258(19)52451-6

関連書籍

Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition (3-Volume Set)

Green, Michael R., Sambrook, Joseph

¥44,500(as of 12/14 13:16)

AmazonRakuten IchibaYahoo

Amazon product information

タンパク質実験ノート〈上〉タンパク質をとり出そう(抽出・精製・発現編) (無敵のバイオテクニカルシリーズ)

¥4,400(as of 12/14 13:16)

AmazonRakuten IchibaYahoo

Amazon product information

タンパク質実験ノート 下 タンパク質をしらべよう (無敵のバイオテクニカルシリーズ)

¥4,400(as of 12/14 18:53)

AmazonRakuten IchibaYahoo

Amazon product information

外部リンク

• ”総”タンパク質定量法の種類をまとめてみた（Thermo Fisher）
• タンパク質を定量したい（同仁化学、PDF）
• 分光光度計を利用したタンパク質の定量（Cytiva）
• タンパク質の定量法（生命医学をハックする）
• タンパク質の定量
• ローリー法 – Wikipedia
• Lowry Protein Assay – Wikipedia
• フォリン・チオカルトー試薬 – Wikipedia