原理

ビシンコニン酸（BCA）法（Bicinconic Acid  Assary）はLowry法をさらに改良した比色法であり、タンパク質濃度定量に用いられる。

Lowry法におけるFolin試薬のかわりにビシンコニン酸 (BCA)を添加する。Cu²⁺がタンパク質によって還元されて生じるCu⁺がBCAと複合体を形成して赤紫色に発色する。この562nmの吸光度を測定し、検量線を用いることによって定量する。

長所

• 測定範囲は0.001-2 mg/mL、感度が高い
• 広い範囲で直線性を示す
• 操作が簡便
• Lowry法よりも界面活性剤の影響を受けにくい

短所

• キレート剤やチオール還元剤などで妨害される

プロトコル

BCAアッセイキットは各社から市販されているが、下記のレシピにて試薬は調製可能である。

BCA試薬の調製法

A液
ビシンコニン酸ナトリウム（10 g）、Na₂CO₃（20 g）、酒石酸ナトリウム（1.6 g）、NaOH（4 g）、NaHCO₃（9.5 g）をMQ水に溶解し、1 Lにメスアップする。その後、10N NaOH水溶液によってpHを11.25に合わせる。室温にて数ヶ月保存可能。

B液
Cu₂SO₄-5H₂O（4 g）MQ水に溶解し、全量100 mLとする。室温にて数ヶ月保存可能。

プロトコル

1. 50容量のA液と、1容量のB液を混合する（用時調製）
2. サンプル（100 μL）に対し、1.の混合液を1mL加え、ボルテックス攪拌する
3. 37℃で30分静置する
4. 562 nmの吸光度を測定する。
5. BSAを標準試料として希釈系列と検量線を作成し、それをもとに濃度を定量する。

関連動画

参考文献

1. ”総タンパク質の定量法”　鈴木祥夫、ぶんせき 2018, 1, 2. [PDF]
2. “[6] Quantification of protein” Stoscheck, C. M. Met. Enzymol. 1990, 182, 50. doi:10.1016/0076-6879(90)82008-P
3. “Measurement of protein using bicinchoninic acid” Smith, P. K. et al. Anal. Biochem. 1985, 150, 76. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

関連書籍

Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition (3-Volume Set)

Green, Michael R., Sambrook, Joseph

¥44,500(as of 12/14 13:16)

AmazonRakuten IchibaYahoo

Amazon product information

タンパク質実験ノート〈上〉タンパク質をとり出そう(抽出・精製・発現編) (無敵のバイオテクニカルシリーズ)

¥4,400(as of 12/14 13:16)

AmazonRakuten IchibaYahoo

Amazon product information

タンパク質実験ノート 下 タンパク質をしらべよう (無敵のバイオテクニカルシリーズ)

¥4,400(as of 12/14 18:53)

AmazonRakuten IchibaYahoo

Amazon product information

外部リンク

• ”総”タンパク質定量法の種類をまとめてみた（Thermo Fisher）
• タンパク質を定量したい（同仁化学、PDF）
• 分光光度計を利用したタンパク質の定量（Cytiva）
• タンパク質の定量法（生命医学をハックする）
• タンパク質の定量
• Bicinconic acid assay – Wikipedia
• ビシンコニン酸 – Wikipedia
• タンパク質定量（BCA法）（PDF）